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          細(xì)胞凍存程序降溫儀介紹與步驟

          點擊次數(shù):14186    更新時間:2017-11-01

           細(xì)胞凍存程序降溫儀介紹與步驟!

              在細(xì)胞培養(yǎng)檢測實驗在實驗儀器、培養(yǎng)基等等工作上都要耗費不少的人力和體力。好在很久以前就有高人發(fā)明了細(xì)胞保存這個實驗步驟,將暫時多出來的細(xì)胞冰凍保存,以zui大程度保存細(xì)胞活力。


          一、細(xì)胞冷凍保存
          1.  材料:
          生長良好之培養(yǎng)細(xì)胞、新鮮培養(yǎng)基、DMSO (Sigma D-2650)、無菌塑料冷凍保存管(Nalgene 5000-0020)、0.  4%(w/v)trypan blue(GibcoBRL15250-061)、血球計數(shù)盤與蓋玻片、細(xì)胞凍存程序儀(也稱為程序降溫儀,品牌上海拓紛)
          2.  冷凍保存方法:
          (1)傳統(tǒng)方法: 冷存管置于4 ℃10分鐘--->-20 ℃30分鐘--->-80 ℃ 16~18小時(或隔夜)--->液氮槽vaporphase長期儲存。
          -20 ℃不可超過1小時,以防止胞內(nèi)冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80 ℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
          (2)程序降溫:利用已設(shè)定程序的等速細(xì)胞凍存程序儀以-1~-3 ℃/分鐘之速度由室溫降至(-80 ℃以下)-120 ℃,再放在液氮槽vaporphase長期儲存。適用于懸浮型細(xì)胞與hybridoma之保存。
          3.  步驟:
          (1)冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基,使細(xì)胞處于指數(shù)生長期。
          (2)配制冷凍保存溶液(使用前配制):另取一離心管,加入培養(yǎng)基、血清,逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度,即制成雙倍的凍存液,置于室溫下待用。
          (3)離心收集培養(yǎng)之細(xì)胞,用加血清的培養(yǎng)基重懸起細(xì)胞,取少量細(xì)胞懸浮液(約0.  1 ml)計數(shù)細(xì)胞濃度及凍前存活率。
          (4)取與細(xì)胞懸液等量的凍存液,緩慢逐滴加入細(xì)胞懸液,并晃動試管,制成細(xì)胞凍存懸液(DMSOzui后濃度為5~10%),使細(xì)胞濃度為1~5×106cells/ ml,混合均勻,分裝于已標(biāo)示*之冷凍保存管中,1~2 ml/vial,并取少量細(xì)胞懸浮液作污染檢測。嚴(yán)密封口后,注明細(xì)胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。

              程序控制冷凍裝置俗稱:程序降溫儀,也稱為程序冷凍儀、胚胎冷凍儀、細(xì)胞冷凍儀、程控降溫儀;廣泛用于凍存細(xì)胞、胚胎等。采用微機控制技術(shù),軟件,能較準(zhǔn)確地控制液氮的施放量,從而保證被凍存的生物制品以適宜的冷凍速率降溫冷凍。該儀器具有操作簡便、人機界面清楚。 



            我國臨床低溫醫(yī)學(xué)工作發(fā)展迅速,促進了移植醫(yī)學(xué)的發(fā)展,特別是在骨髓、造 血干細(xì)胞、皮膚、角膜、內(nèi)分泌腺體、以及血管和瓣膜等的冷凍保存和移植應(yīng)用取 得了顯著成績。成功的造血干細(xì)胞移植依賴于造血干細(xì)胞活力的保存。生物樣品在 降溫冷凍過程中,當(dāng)由液態(tài)向固態(tài)變化的相變期內(nèi)會釋放一定熱量,使其溫度回升, 不控制降溫速率的冷凍過程將會導(dǎo)致組織細(xì)胞死亡。準(zhǔn)確地測定生物樣品的相變點, 用微機編制降溫程序,以便在樣品相變時加大液氮輸入量,克服相變樣品溫度的回 升,使細(xì)胞安全而迅速地度過相變期,這是提高被凍樣品成活率的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

           ☆主要技術(shù)指標(biāo)☆
               溫度控制范圍:40℃~-180℃.
               溫度精度:    誤差<1℃
               降溫速度:    0.1℃/分~50℃/分范圍內(nèi)可選
               升溫速度:    0.1℃/分~30℃/分范圍內(nèi)可選


          ☆儀器結(jié)構(gòu)☆:本儀器由以下四部分構(gòu)成(標(biāo)準(zhǔn)配置):
          溫控系統(tǒng):在機箱上配置高精度智能溫控器,該溫控器通過RS485通訊協(xié)議和電腦連接;
          電腦軟件:在電腦中運行上位機軟件,即可設(shè)定控溫程序,對箱體控溫;
          冷凍箱:  內(nèi)外全不銹剛結(jié)構(gòu).冷凍容機不小于200*200*200毫米.可同時容納冷凍管160個或血袋8個.
          液氮罐及液氮加壓器: 液氮加壓器安裝在30立升的液氮罐上,使罐內(nèi)自增壓,調(diào)節(jié)閥保持壓力穩(wěn)定.
          ☆軟件功能☆
          1、顯示功能:
          運行顯示如圖:.每步操作,每個功能都有屏幕顯示.實時顯示儀器工作狀態(tài)﹑溫度數(shù)據(jù)和曲線.

          2、 編程功能:
          可編制任意段數(shù)的用戶程序.計算機按照用戶程序控制冷凍過程.用戶程序可方便地編制﹑修改﹑存儲﹑調(diào)出.開機自動調(diào)出當(dāng)前用戶程序.
          3、運行控制功能:
          隨機恒溫功能: 可隨時進入,隨時解除恒溫。
          自動控制:設(shè)定程序后,可*自動運行。
          手動控制: 程控時手控可參與控制.也可*手控。
          4、數(shù)據(jù)處理功能
          每次冷凍的全部數(shù)據(jù)和有關(guān)信息,都能自動形成一個數(shù)據(jù)文件存儲下來;
          溫度數(shù)據(jù)和速度可按時間間隔列表或顯示溫度曲線.
          可迅速方便地雙向檢索已存入的數(shù)據(jù)文件;
          溫度曲線可局部放大,便于研究關(guān)鍵段的細(xì)微變化;
          還有一些功能恕不一一列出,這些功能如能配合使用,將為您的冷凍帶來極大的方便.
          5、軟件升級
            隨著公司軟件不斷的更新,用戶可享受免費升級服務(wù).
           
          詳細(xì)配置清單

           

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